А.Г. Камкин1,2, С.И. Кирищук3, И.С. Киселева1,2
ВВЕДЕНИЕ
Настоящий прорыв в исследованиях мембран клеток вызвал так называемый метод patch-clamp, который был создан на основе метода внутриклеточного диализа клеток, разработанного в 1976 г. в Институте физиологии им. А.А. Богомольца (Киев) под руководством акад. П.Г. Костюка [1, 2]. Метод patch-clamp предложили в 1976 г. E. Neher и B. Sakmann [5]. И хотя в его основе лежал принцип исследования клеток методом диализа, предложенный метод отличался рядом технических модификаций и был крайне сложным. Однако уже в 1981 г., после публикаций O.P. Hamill и соавт. [3, 4], этот метод превратился в общедоступный, позволяющий проводить любые измерения на клеточном уровне. В настоящее время все электрофизиологические исследования мембран клеток производят при помощи данного метода.
Метод patch-clamp позволяет регистрировать на изолированных клетках их потенциалы, токи или одиночные ионные каналы посредством специальной стеклянной пипетки (patch-пипетки), напоминающей микроэлектрод, но имеющей сопротивление от 2 до 10 МОм в зависимости от типа исследуемых клеток. Кроме того, метод позволяет регистрировать ионные каналы с изолированного кусочка мембраны, который может быть расположен по отношению к отверстию пипетки либо внешней, либо внутренней стороной.
На рис. 2.1 показаны микроэлектрод и patch-пипетка и продемонстрированы их основные отличия.
По сравнению с методами микроэлектродной техники и классической фиксации потенциала применение пипетки имеет ряд положительных моментов. Во-первых, техническая поддержка метода позво-