Л.Ю. Сосулина1
ВВЕДЕНИЕ
Долгое время после того, как метод patch-clamp был описан впервые, его применение для изучения свойств нервных клеток было весьма ограничено, так как не представлялось возможным получать неповрежденные нейроны. В связи с этим электрофизиологические эксперименты проводили на первичных культурах нейрональных и глиальных клеток или на клетках, изолированных из ткани путем ее обработки ферментами. Проблема изолирования клеток и получения качественной электрофизиологической записи была решена в конце 1980-х годов с развитием экспериментального подхода, позволяющего применять метод patch-clamp на срезах мозга [1, 5].
Преимущество использования срезов мозга для patch-clamp экспериментов и огромный успех данного метода состоят в том, что он позволяет изучать клетки в условиях практически интактной нервной системы при сохранении синаптических контактов. Применение patch-clamp на срезах мозга не требует предварительной обработки ферментами, которая может привести к изменению свойств мембран клеток, и, кроме того, позволяет изменять внутриклеточную среду при использовании пипеточных растворов, различающихся по составу, производя записи активности отдельных нейронов в условиях, максимально приближенных к физиологическим. Конфигурация whole-cell позволяет инъецировать в клетку красители разной природы, при помощи которых клетку можно охарактеризовать морфологически с применением методов иммуногистохимии. Введение флуоресцентных красителей и использование конфокальной микроскопии позволяют наблюдать за изменением структуры и функции отдельных синаптических окончаний на живых срезах мозга. Кроме