IV.6.1. ДИСК-ЭЛЕКТРОФОРЕЗ БЕЛКОВ
При диск-электрофорезе создают скачкообразные изменения концентрации (и, следовательно, пористости) геля, рН, градиента напряжения. Вертикальный диск-электрофорез предполагает использование 2, а иногда и 3 наслаиваемых друг на друга гелевых слоя:
1) Стартовый гель (sample-гель) - присутствует не всегда. Он располагается сверху, содержит пробу и краситель - «свидетель», который будет показывать движение электрофоретического фронта. Стартовый гель предотвращает смешивание раствора пробы с электродным буфером.
2) Концентрирующий гель - крупнопористый гель. Размер его пор ограничивает диффузию, но не обеспечивает гелю свойства молекулярного сита по отношению к разделяемым белкам. Этот гель нужен для электрохимического концентрирования белков пробы, т.е. концентрирующий гель собирает смесь белков перед переходом в разделяющий гель в одну узкую полосу.
3) Разделяющий (сепарирующий, разрешающий, running-гель) - нижний мелкопористый гель, в котором собственно и происходит электрофоретическое и молекулярно-ситовое разделение компонентов пробы. Диск-электрофорез проводится в комбинированной системе буферов - с отличающимися значениями рН и различного компонентного состава в электродных частях верхнего и нижнего геля (рис. IV.6.1).
Наличие прерывистой системы буферов увеличивает разрешающую способность метода из-за возникающего электрохимического эффекта, обеспечивающего концентрирование компонентов пробы и образование тонкой стартовой зоны на границе концентрирующего и разделяющего гелей. Буферные смеси подбирают так, чтобы электрофоретическая подвижность ионов в одной из них была выше, чем в другой. Например, в электрофоретической системе (см. рис. IV.6.1).
&hide_Cookie=yes)
Рис. IV.6.1. Прерывистая система буферов