Наряду с нередко возникающими затруднениями в интерпретации результатов, в ходе гистохимических исследований присутствуют тонкости практического характера, связанные с соблюдением ряда требований.
1. Прежде всего при проведении гистохимического исследования необходимо свести к минимуму влияние подготовительных процедур (препарирования, фиксации, промывки от фиксатора и др.).
2. Реакция должна быть более или менее специфичной, то есть «метить» строго определенное соединение (как ферментативной, так и неферментативной природы).
В этом смысле окраску гематоксилином нельзя строго рассматривать в качестве гистохимической реакции, поскольку ба-зофилия, появляющаяся под действием этого реагента, может быть обусловлена наличием нуклеиновых кислот, кислых белков и кислых мукополисахаридов (последние, как правило, локализуются в межклеточном веществе).
В тех случаях, когда строгой специфичности достичь невозможно, приходится проводить сравнение с соответствующими контрольными препаратами, которые должны инкубироваться параллельно. Например, в ходе ШИК-реакции, используемой для выявления гликогена, малиновую окраску дают и другие полисахариды, вклад которых в общий (суммарный) результат реакции можно выяснить, дополнительно инкубируя препарат, предварительно обработанный амилазой (с этой целью наиболее
часто используется амилаза слюны). Уровень положительной ШИК-реакции на препарате, обработанном амилазой, как раз и будет связан с влиянием полисахаридов, не имеющих отношения к гликогену, и может быть вычтен из общей (суммарной) реакции.
Учет специфичности особенно важен в гистохимии ферментов, в этом случае речь идет прежде всего о контроле специфичности субстрата, на который (в идеале) должен воздействовать только один фермент. В частности, в ходе проведения гистохимической реакции на кислую фосфатазу необходимо принимать во внимание возможность влияния на конечный результат другого фермента - щелочной фосфатазы, которая при своей высокой активности может проявляться и при более низких значениях рН (то есть в нейтральной и кислой среде). Влияние щелочной фос-фатазы в этом случае устраняется добавлением в инкубационную среду ее ингибиторов (как правило, цистеина или трилона Б).